畜牧与动物医学论文_牛环形泰勒虫AMA1基因表达

文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 样品

    1.1.2 主要试剂

    1.1.3 主要仪器

1.2 方法

    1.2.1 TaAMA1目的基因扩增

    1.2.2 构建重组pMD18-T-AMA1质粒及验证

    1.2.3 构建重组pET-28a-AMA1和pET-28a-AMA1表达质粒及验证

    1.2.4 获得蛋白序列及构建系统发育进化树

    1.2.5 理化性质分析、抗原表位及亚细胞定位预测

    1.2.6 蛋白高级结构预测

2 结果

2.1 牛环形泰勒虫AMA1基因PCR扩增

2.2 牛环形泰勒虫AMA1基因表达载体的构建及验证

2.3 AMA1生物信息学分析

    2.3.1 牛环形泰勒虫AMA1同源性分析及构建系统进化树

    2.3.2 理化性质、信号肽及跨膜区域

    2.3.3 磷酸化位点

    2.3.4 B细胞抗原表位分析

    2.3.5 亚细胞定位

    2.3.6 二级结构

3 讨论

文章摘要:为构建牛环形泰勒虫AMA1（TaAMA1）截短基因原核、真核表达载体,对其编码的蛋白进行生物信息学分析,以牛环形泰勒虫阳性DNA为模板,在牛环形泰勒虫AMA1基因的开放性阅读框内设计特异性引物,采用PCR扩增AMA1基因,构建其原核表达质粒pET28a-AMA1及真核表达质粒pEGFP-AMA1。通过生物信息学在线软件分析TaAMA1基因的系统进化树及该蛋白的理化性质、磷酸化位点、亚细胞定位、抗原表位及二级结构,构建该重组蛋白系统发育进化树。结果显示,TaAMA1基因PCR扩增产物大小为828 bp,与预期片段一致,构建的重组质粒经双酶切鉴定表明目的基因插入正确,测序结果与GenBank已收录的牛环形泰勒虫AMA1基因序列（KX231677.1）同源性为99.72%,同源性及系统进化树分析发现与小泰勒虫氨基酸序列同源性最大为69.9%,生物信息学分析发现TaAMA1基因编码蛋白含276个氨基酸,分子式为C_{1 331}H_{2 134}N₃₉₈O₄₁₃S₄,分子质量为30.448 ku,理论等电点为9.94,有38个磷酸化修饰位点,无跨膜区及信号肽,亚细胞定位预测位于细胞核的比例为87%;B细胞抗原表位分析发现该蛋白含有9个潜在抗原表位;TaAMA1蛋白的二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲和延伸链分别占23.91%、7.61%、49.64%和18.84%。成功构建重组原核表达质粒pET28a-AMA1及真核表达质粒pEGFP-AMA1并进行生物信息学分析,为牛环形泰勒虫AMA1蛋白生物学功能及入侵机制研究奠定了基础。

文章关键词:

项目基金: